کاسپازها؛ خودکشی مهندس ها
خودکشی لنفوسیت های مهندسی شده؛ ایده ای جذاب برای جلوگیری از اثرات جانبی آن ها
کاسپازها مولکول هایی کمک کننده برای حذف اثرات جانبی سل تراپی هستند. سل تراپی بدون شک ابزاری کاربردی برای استفاده در ایمونوتراپی سرطان و همینطور پزشکی بازساختی محسوب می شود. این به شرطی است که حذف سریع سلول های وارد شده به بدن وجود داشته باشد.
کاسپازها پروتئین های اجرایی و مرکزی در مسیر مرگ سلولی محسوب می شوند. یکی از کاسپازهای اجرایی کاسپاز 9 می باشد که حین روند طبیعی آپوپتوز در سلول ها، در نتیجه یک روند آبشاری پروکاسپاز9 به کاسپاز 9 فعال تبدیل می شود و در نهایت با تکه تکه کردن ِDNA سلول باعث مرگ سلولی می شود.
در مطالعه فعلی با محوریت قرار دادن بیان تحت کنترل CASPASE9 نوعی inducible T-cell safety switch (کلید ایمنی سویچ شونده برای سلول) طراحی گردیده است. به طور کلی در این نوع از طراحی ها مهم ترین نکته این می باشد که بیان یک پروتئین تحت کنترل و اراده ما قرار گیرد و با استفاده از یک محرک مانند تجویز نوعی دارو به یکباره بیان و تولید شود و جان سلول خاطی را در کمترین زمان ممکن بگیرد!!!
در اینجا دو نوع پروتئین کاملا مجزا با یکدیگر فیوز (الحاق) گردیده اند:
- human caspase 9
- modified human FK-binding protein
در نتیجه الحاق این دو پروتئین امکان دایمریزاسیون شرایطی کاسپاز9 در صورت نیاز فراهم گردیده است که محرک در اینجا داروهای دایمریزه کننده می باشد.
| پروتئین اجرایی دخیل در آپوپتوز | پروتئینی که به کاسپاز الحاق می شود | چاشنی برای آغاز روند مرگ | مکانیسم |
| human caspase 9
|
modified human FK-binding protein
|
synthetic dimerizing drug | When exposed to a synthetic dimerizing drug, the inducible caspase 9 (iCasp9) becomes activated and leads to the rapid death of cells expressing this construct |
برای اثبات اثر بخش بودن این مکانیسم محافظتی حین سلول درمانی این گروه از محققین 5 بیمار را با لنفوسیت های T تغییر ژنتیک یافته اهدایی از یک دهنده آلوژن تریت نمودن و به طور جالبی متوجه شدند که به دنبال تجویز یک دوز واحد از داروی توضیح داده شده (dimerizing drug ) در 4 بیماری که در آن ها علائم آغاز GVHD وجود داشت در کمتر از 30 دقیقه روند GVHD موتقف گردید.
برخی از مکانیسم های مورد استفاده در خودکشی سلول ها عبارت اند از :
القای بیان herpes simplex virus thymidine kinase (HSV-TK) در سلول های ترانسفورم شده که ایراد اصلی این روش تداخل در سنتز DNA است که می تواند بسیار خطرناک باشد و توکسیسیتی بالایی را به دنبال داشته باشد.
از طرفی در این روش ممکن ست مرگ سلولی و پاکسازی سلول مدنظر ما چندین روز به طول انجامد که این موضوع با توجه به اورژانس بودن شرایط در سلول درمانی نا امید کننده محسوب می شود.
نکات روش تولید پروتئین الحاقی
Generation of Allodepleted T Cells
جدا کردن PBMC ها و کشت دادن با لنفوسیت های آلوده به EBV به عنوان محرک در محیط فاقد سرم (AIM V, Invitrogen )
بعد از 72 ساعت لنفوسیت های فعال شده که CD25 را بر سطح خود بیان می کردند را با استفاده از (monoclonal antibody RFT5 ) حذف نمودند.
در نهایت این لنفوسیت ها با استفاده از آنتی بادی مونوکلونال ضد CD25 از بین می رفتند و برای تاییید آن کاهش آن ها به کمتر از یک درصد و تکثیر به دنبال تحریک توسط سلول های گیرنده کمتر از 10 درصد انجام پذیرفت.
Plasmid, Retrovirus, and Retroviral Transduction
طراحی پروتئین الحاقی در سطح ژن و ورود آن به سلول بر اساس تکنیک توضیح داده شده همانطور که ملاحضه می کنید بسیار خلاصه و موردی اشاره شده است.
در نهایت تایید بیان پروتئین کایمر با استفاده از Immunophenotyping, Spectratyping, and PCR تکنیک فلو و PCR
آیا سیستم ایمنی به مرخصی می رود؟ بیشتر بخوانید!
IMMUNOLOGYTODAY
BETTER INTERACTION; BETTER LIFE
دیدگاهتان را بنویسید